Federación Mexicana de Patología Clínica, A.C.

I N T R O D U C C I Ó N

Trampas extracelulares de Neutrófilos (NETs) tendrían un rol central en el desarrollo de hipercoagulabilidad, inmunotrombosis y daño de órganos en pacientes con COVID-19. Si bien su identificación morfológica en la rutina del laboratorio clínico es compleja, evidencia reciente describe la identificación de NETs en sangre periférica mediante el uso de sistemas de morfología digital, reportándose además la asociación de índices relacionados a NETs con riesgo mortalidad en pacientes con COVID-19.

O B J E T I V O

Identificar variaciones morfológicas y de parámetros relacionados con NETs en pacientes hospitalizados por COVID-19 y su potencial correlación con cambios de parámetros inflamatorios y severidad de la enfermedad.

M A T E R I A L E S  Y  M É T O D O

Un total de 50 pacientes hospitalizados por COVID-19 atendidos en el Hospital Dr. Hernán Henríquez Aravena de Temuco fueron incluidos en el estudio, siendo aprobado por un Comité de Ética Científica acreditado. Pacientes fueron diagnosticados de acuerdo a criterios establecidos, siendo confirmados por detección molecular de SARS-CoV-2 de especímenes de hisopado nasal y faríngeo. Por su parte, la severidad fue definida de acuerdo a WHO Clinical Progression Scale. Todas las muestras fueron colectadas por métodos estandarizados dentro de las primeras 24 horas de la admisión hospitalaria. La cuantificación de parámetros inflamatorios proteína C reactiva y ferritina se realizó por ensayo inmunoturbidimétrico y electroquimioluminiscencia, respectivamente. Conteo sanguíneo completo se realizó utilizando autoanalizador hematológico, obteniendo además la razón neutrófilos-linfocitos (NLR) y razón plaquetas-linfocitos (PLR).

La preparación del extendido de sangre periférica y la tinción May-Grünwald-Giemsa se realizaron mediante un equipo automatizado, mientras que el recuento diferencial leucocitario fue realizado utilizando el sistema de morfología digital Cellavision DM1200 (200 células por paciente, n=10000 células). La revisión de morfología digital fue realizada por 2 profesionales experimentados y la descripción se realizó de acuerdo con las recomendaciones nacionales. Cambios morfológicos fueron reportados como positivos cuando se observaron en a lo menos el 5% de las células en sangre periférica. Finalmente se calcularon los parámetros relacionados con NETs: NETs / 100 leucocitos y la razón NETs / neutrófilos segmentados. Para la comparación entre dos grupos se aplicó la prueba t-Student para distribuciones normales o la prueba de Mann-Whitney para distribuciones no normales. El análisis de correlación entre marcadores de inflamación, parámetros hematológicos y alteraciones morfológicas fue realizado utilizando la correlación de Pearson, considerando estadísticamente significativo un valor de p < 0.05.

R E S U L T A D O S

Se observó elevación de biomarcadores de inflamación PCR y ferritina, además de NLR y PLR. Respecto de la morfología sanguínea, destaca la presencia de granulación tóxica (100%), cuerpos de Döhle (80%) en neutrófilos y Linfocitos reactivos (60%). Trampas extracelulares de Neutrófilos (NETs) fueron identificadas en el 66% de los pacientes, observando una correlación entre NLR y la presencia de NETs (r = 0.312, p<0.05). Finalmente, se observó un mayor número de NETs / 100 leucocitos en pacientes con COVID-19 severo (5,8 + 7,341 moderados vs 14,14 + 15,12 severos; p=0,0294).

C O N C L U S I O N E S

Se describe una elevada presencia de NETs en pacientes hospitalizados por COVID-19, lo que se correlacionó positivamente con NLR. Al evaluar parámetros relacionados con NETs, pacientes COVID-19 severo presentaron un mayor número de NETs / 100 leucocitos. Otros estudios son necesarios para evaluar la potencial utilidad de NETs y parámetros asociados como marcador de severidad de la enfermedad.